智立中特（武漢）生物科技有限公司主要致力于質(zhì)粒微生物資源的保護(hù)、共享和持續(xù)利用，圍繞我國(guó)生命科學(xué)研究、生物技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展等重大需求，探索、發(fā)現(xiàn)、收集國(guó)內(nèi)外的微生物資源，妥善長(zhǎng)期保存管理；在保證生物安全和保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的前提下，為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、衛(wèi)生健康、環(huán)境保護(hù)、科研教育提供質(zhì)粒載體物物種資源、基因資源、信息資源和專(zhuān)業(yè)技術(shù)服務(wù)。旗下質(zhì)粒載體網(wǎng)是一款提供質(zhì)粒載體展示及定制的專(zhuān)業(yè)型網(wǎng)站，由智立中特（武漢）生物科技有限公司聯(lián)合多家企業(yè)公司科研院校共同打造！主要展示了各種基因類(lèi)型下的質(zhì)粒載體！

　　我們的工作主要包括：廣泛分離、收集、保藏、交換和供應(yīng)各類(lèi)微生物質(zhì)粒菌種；保存用于專(zhuān)利程序的各種可培養(yǎng)生物材料；質(zhì)粒載體類(lèi)保藏技術(shù)研究；微生物分離、培養(yǎng)技術(shù)研究；微生物鑒定和復(fù)核技術(shù)研究；保藏菌種的資料情報(bào)收集和提供及編輯微生物菌種目錄。

　　目前保存各類(lèi)載體資源超過(guò)20000余種，質(zhì)粒微生物約5000株，另外我們還代理國(guó)外微生物菌種資源，如addgene，安捷倫，thermo，atcc等。

　　名稱(chēng):293F(人胚腎細(xì)胞)

　　別稱(chēng):HEK-293-F;HEK 293-F;HEK-293F;HEK293F;293-F;293 F;HEK293-F

　　種屬:人

　　年齡（性別）:胚胎

　　生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞

　　細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣

　　生長(zhǎng)培養(yǎng)基:DMEM)＋10%FBS＋1%P/S

　　推薦傳代比例:1:3-1:4

　　推薦換液頻率2~3次/周

　　凍存條件

　　凍存液：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

　　溫度：液氮

　　培養(yǎng)條件

　　氣相：空氣，95%；CO2，5%

　　溫度：37℃

　　驗(yàn)收細(xì)胞注意事項(xiàng)

　　1、收到293F(人胚腎細(xì)胞)，請(qǐng)查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請(qǐng)盡快聯(lián)系。

　　2、收到293F(人胚腎細(xì)胞)，如包裝完好，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀(guān)察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái)，顯微鏡下觀(guān)察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí)，請(qǐng)不要打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀(guān)察，此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁，請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理。

　　3、收到293F(人胚腎細(xì)胞)后，請(qǐng)鏡下觀(guān)察細(xì)胞，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)離心收集細(xì)胞，接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進(jìn)口胎牛血清。剛接到細(xì)胞，若細(xì)胞不多時(shí)血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％。

　　4、收到293F(人胚腎細(xì)胞)時(shí)如無(wú)異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀(guān)察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

　　5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過(guò)的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時(shí)之需。

　　6、24小時(shí)后，293F(人胚腎細(xì)胞)已恢復(fù)并貼滿(mǎn)瓶壁，即可傳代。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘，不超過(guò)5分鐘。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁，見(jiàn)細(xì)胞脫落下來(lái)，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之完全脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過(guò)稀，有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。

　　7、貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無(wú)菌操作。換液時(shí)，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)。